Например, фракцию, полученную после гель-фильтрации или ионообменной хроматографии, дальше анализируют методом ВЭЖХ.
уроки . Основная часть сухого вещества яда представлена белками и пептидами—около 80%. Все они являются активными веществами. Благодаря современным методам выделения и анализа сегодня идентифицировано 98% компонентов пчелиного яда. Выделение отдельных компонентов яда является достаточно сложной и трудоемкой задачей. Это связано с тем, что яд состоит
из сложной смеси высокомолекулярных белков, полипептидов и низкомолекулярных компонентов в различных количествах. Так, присутствие пептида мелиттина в яде в количестве 40-50% от всего секрета затрудняет выделение компонентов, имеющих примерно равную молекулярную массу, но присутствующих в количествах, менее 1%. Тем не менее, эти задачи успешно решаются с применением различных методических приемов разделения, основанных на разных физико-химических свойствах компонентов. Так, используя электрофорез, разделяют компоненты яда в электрическом поле, основываясь на величине и полярности зарядов молекул. Метод гель-фильтрации позволяет фракционировать яд по молекулярной массе. При этом используют пропускание раствора яда через колонки, наполненные высокогидрофильными декстранами (сефадексы) или полиак-риламидными гелями. Они хорошо набухают в воде, образуя гели, которые действуют подобно молекулярному ситу. Величину ячеек сита подбирают, используя разные типы сефадексов и биогелей. Ионообменная хроматография позволяет разделить белки яда в соответствии с зарядами их функциональных групп, обладающих тем или иным сродством к полимерным смолам, через которые пропускается раствор яда.
В последние годы для разделения пептидов пчелиного яда широко применяется высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). Разделение проводится с помощью специального жидкостного хроматографа, в комплект которого входят: колонки, заполненные специальным образом носителями — силикагелем или силикагелем с обращенной фазой; насос, позволяющий создавать давление до 200 атм., градиентный смеситель и высокочувствительный детектор. Проходящий через колонку под большим давлением раствор яда в определенных растворителях разделяется на фракции соответственно гидрофильности и гидрофобности молекул, т.е. их способности в той или иной степени удерживаться гидрофобными частицами носителя. Следует отметить, что для более детального анализа часто применяется не один, а несколько методов разделения, следующих последовательно. Например, фракцию, полученную после гель-фильтрации или ионообменной хроматографии, дальше анализируют методом ВЭЖХ. В таблице 1 приведен химический состав пчелиного яда.